10ul接種環是微生物實驗中用于菌種接種、菌液轉移的核心工具,廣泛應用于細菌培養、菌落計數、藥敏試驗等場景。其精準操作直接影響實驗結果的重復性與準確性,需嚴格遵循滅菌規范、取樣技巧、接種操作三大核心流程,具體指南如下。
滅菌是避免雜菌污染的關鍵步驟,10ul接種環需采用干熱滅菌或火焰滅菌兩種方式,優先選擇火焰滅菌,操作便捷且滅菌完整。
1.火焰滅菌流程:將接種環固定在接種棒上,手持接種棒末端,將接種環伸入酒精燈外焰,緩慢旋轉灼燒至環體呈均勻紅熱狀態,灼燒時間不少于30秒,確保殺滅環體表面的所有微生物。灼燒時需注意接種棒握持角度,避免火焰灼燒接種棒手柄導致材質碳化。
2.冷卻處理:滅菌后的接種環溫度較高,直接接觸菌液會導致菌體死亡,需在無菌培養基的空白區域輕輕觸碰冷卻,或靜置10–15秒自然降溫,冷卻過程中不可觸碰非無菌區域,防止二次污染。
3.重復滅菌要求:每次接種完成后,需再次灼燒滅菌,避免菌種交叉污染;連續多次接種不同菌株時,需更換接種環或滅菌后再使用。
二、10ul接種環液體掛取核心技巧
10ul接種環的環體容積精準對應10μL液體,掛取時需控制力度與角度,確保液體量準確且不滴落,具體技巧如下。
1.掛取前狀態確認:冷卻后的接種環需保持干燥,若環體殘留水珠,會稀釋菌液濃度,導致取樣量不準。可將接種環在無菌空氣中輕晃,去除表面冷凝水。
2.液體掛取操作:手持接種棒,將接種環以30°–45°角緩慢浸入菌液或液體培養基中,確保環體全浸沒,避免僅觸碰液面導致掛液不足。隨后勻速緩慢提起接種環,此時環內會自然形成一層液體薄膜,其體積即為精準的10μL。
若掛取高粘度液體(如含瓊脂的半固體培養基),可適當降低浸入速度,防止液體粘連過多;若液體流動性強,提起后可在容器內壁輕靠一下,刮除多余液體。
3.防滴落控制:掛取液體后,接種環需保持水平或略微向下傾斜,避免劇烈晃動。轉移過程中動作要平穩,若液體出現滴落趨勢,可將接種環靠近容器內壁,利用表面張力將液體回吸至環內。

三、接種操作規范與使用后處理
1.接種操作要點:進行平板劃線接種時,用掛有菌液的接種環在培養基表面輕輕劃動,力度以不劃破培養基為宜;進行液體接種時,將接種環直接浸入目標培養基,輕輕旋轉后取出,確保液體全融入培養基。接種過程需在超凈工作臺內完成,操作時間盡量縮短,減少空氣雜菌污染概率。
2.使用后清潔與滅菌:接種完畢后,立即將接種環灼燒滅菌,待環體冷卻后,用無菌水沖洗環體表面殘留的培養基,再次灼燒至紅熱狀態,確認無殘留后放置在接種環架上冷卻備用。
3.常見誤區規避:禁止用接種環反復攪拌液體培養基,防止環體變形影響掛液精度;避免未冷卻的接種環直接接觸菌液,造成菌體熱死亡;不可用手觸碰接種環任何部位,防止污染或燙傷。
10ul接種環的正確使用需兼顧滅菌完整性、掛液精準性與操作規范性,只有嚴格遵循流程,才能保障微生物實驗數據的可靠與穩定。